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黄酮类化合物的提取分离
一、提取
黄酮苷和极性较大的苷元：甲醇，乙醇，甲醇-水(1：1)，丙酮，乙酸乙酯。
多糖苷：沸水
花色苷：0.1%盐酸进行提取。
苷元：氯仿，乙醚，乙酸乙酯。
注意：苷类提取防止酶解。
(一)溶剂萃取法：自浸膏中先用乙醚萃取苷元，再用乙酸乙酯反复萃取苷，最后用正丁醇萃取极性较大的苷。
(二)碱提酸沉法
(1) 常用碱水：石灰水，Na2CO3，稀NaOH，碱性稀醇。
酸沉：盐酸
注意：酸碱浓度不宜过高。
碱性过强，破坏黄酮母核;酸性过强，生成佯盐，影响产率。
石灰水：可除去鞣质，果胶，粘液质，有利于纯化。但浸出效果不及NaOH ，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。 稀NaOH：浸出效率高，但杂质多。
二、分离方法
分离的基本依据：
极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构。
(一)柱色谱法
1、硅胶柱色谱法
适于分离异黄酮，二氢黄酮(醇)和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇类。
分离苷元时：氯仿-甲醇混合溶剂洗脱。
分离苷时：氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水
2、聚酰胺柱色谱
适于黄酮类化合物的分离。
规律：
A：苷元相同时，以含水移动相洗脱，被吸附的强弱顺序为： 苷元>单糖苷>双糖苷>双糖键苷。
B：与酚羟基的数目有关，数目越多，吸附力越强。与酚羟基的位置有关，如果酚羟基所处的位置易形成分子内氢键，则吸附力减弱。
查耳酮>二氢黄酮， 黄酮>二氢黄酮
C：不同类型黄酮类化合物，被吸附的强弱顺序为：黄酮醇>黄酮>二氢黄酮>异黄酮。
D：分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附力越强。
3、葡聚糖凝胶色谱法
凝胶类型：Ssephadex LH-20和Sephadex G两种类型的凝胶。
分离苷元时：利用吸附作用，游离酚羟基数目越多，则吸附力越强，越难洗脱。
分离苷时：主要靠分子筛，洗脱时按苷分子量由大到小的顺序依次被洗脱出柱体。
黄酮类化合物 取代基 Ve/Vo
芹菜素 5，7，4'-三羟基 5.3
木犀草素 5，7，3'，4'-四羟基 6.3
槲皮素 3，5，7，3'，4'-五羟基 8.3
杨梅素 3，5，7，3'，4'，5'-六羟基 9.2
山柰酚-3-鼠李糖基 三糖苷 3.3
半乳糖-7-鼠李糖苷
槲皮素-3-芸香糖苷 双糖苷 4.0
槲皮素-3-鼠李糖苷 单糖苷 4.9
常用的洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液、醇及含水醇
(二)PH梯度法：用不同浓度的碱分离
(三)硼酸络合法 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物可与硼酸络合生成易溶于 水的化合物。
